1、Culture-Inserts插件可以重復(fù)使用嗎？

盡管 Culture-Inserts 插件中的材料可高壓**并且與酒精相容，但我們不建議重復(fù)使用。 如果您仍想嘗試重復(fù)使用，則需要建立一個用酸或堿的清潔程序。 ibidi沒有任何清潔Culture-Inserts插件的經(jīng)驗(yàn)，雖然它們可能會保持粘性，但之前實(shí)驗(yàn)的殘留可能會影響重現(xiàn)性。 

2、可否在蓋玻片上使用 Culture-Inserts插件嗎？

可以，您可以在任何蓋玻片上使用 Culture-Inserts插件。 到目前為止，還沒被報(bào)告與任何干燥表面不相容。 

3、是否可以使用 Culture-Insert 插件制作小于 500 μm 的傷口？

不可以，Culture-Inserts 插件中*小和標(biāo)準(zhǔn)的傷口尺寸是 500 μm。 Culture-Insert 4 Well /4孔插件會有一個額外的中心間隙，傷口大小為 1000 μm。

4、Culture-Insert 插件是如何固定在培養(yǎng)皿上的？

Culture-Insert 插件由生物相容的硅膠材料制成。 硅膠底部有一個粘性表面，可粘附（粘）在任何平坦、干燥、均勻的表面。 這種材料足夠柔軟可粘到表面上。 您可以用無菌鑷子按壓插件來簡單地修復(fù)它。

 5、您是否曾經(jīng)遇到過 Culture-Inserts 插件無法粘附在定制涂層表面上的問題？

只要表面干燥，我們從未遇到過讓 Culture-Inserts 插件粘附在定制涂層表面上的任何問題。 但是，潮濕的表面會導(dǎo)致泄漏。 因此，請確保您的定制涂層表面完全干燥。

6、需要在 Culture-Insert 插件中播種多少個細(xì)胞才能進(jìn)行細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)？

開始遷移實(shí)驗(yàn)時，Culture-Insert 插件中的細(xì)胞層應(yīng)融合。 在所有實(shí)驗(yàn)中，匯合細(xì)胞層的密度應(yīng)盡可能一致。 使用的接種細(xì)胞數(shù)量取決于您的細(xì)胞類型，因此您可以在 Culture-Insert 2 Well 說明書中找到推薦的范圍和詳細(xì)方案。 

7、為什么移除 ibidi Culture-Insert 插件后細(xì)胞有時會從蓋玻片上脫落？

以下是解釋細(xì)胞脫離的一些可能原因：

? 細(xì)胞密度太高。 --> 播種更少的細(xì)胞（細(xì)胞層應(yīng)在 24 小時后生長至 100% 融合，但不能過度生長）。有關(guān)傷口**試驗(yàn)的詳細(xì)方案，請參閱：傷口**／細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)新方法－如何劃出筆直均一的劃痕

? 細(xì)胞正在挨餓。 --> 增加每個插入孔的培養(yǎng)基體積，或在細(xì)胞生長期間更換培養(yǎng)基。

? 在極少數(shù)情況下，細(xì)胞類型不能很好地粘附在 ibiTreat 表面。 --> 首先，覆蓋蓋玻片表面以促進(jìn)細(xì)胞附著。然后，在插入 ibidi Culture-Insert 插件之前讓涂層干燥。

以下是使用帶有涂層的 ibidi Culture-Inserts 插件以促進(jìn)細(xì)胞粘附的一些額外提示：

? 我們強(qiáng)烈建議提前測試移除ibidi Culture-Insert 插件是否會破壞遷移間隙中的涂層。這可以通過使用針對涂層蛋白的熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行分析。如果遷移間隙區(qū)域中涂層的熒光信號與開放孔中的一樣均勻和強(qiáng)烈，則可以假設(shè)在插入物移除后是保持完好的。經(jīng)過幾次成功的測試后進(jìn)行實(shí)際實(shí)驗(yàn)通常是**的。

? 如果去除插入物破壞了大部分涂層，則僅涂覆插件的孔，然后接種細(xì)胞。取出插件后，通過向培養(yǎng)基中添加低濃度涂層來填充間隙并孵育約 30 分鐘。之后，用普通介質(zhì)替換涂層溶液并繼續(xù)進(jìn)行遷移實(shí)驗(yàn)。

8、當(dāng) Culture-Insert變干燥時，包被蛋白會失去活性嗎？

這主要取決于與 Culture-Insert 插件一起使用的蛋白質(zhì)類型。 使用層粘連蛋白的人通常更喜歡在涂層和細(xì)胞接種之間保持水分。 根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)，當(dāng)纖連蛋白和膠原蛋白 IV 干燥時，我們沒有發(fā)現(xiàn)對細(xì)胞遷移速度有任何影響。 

9、有沒有辦法用懸液細(xì)胞進(jìn)行傷口**實(shí)驗(yàn)，或者該實(shí)驗(yàn)僅適用于貼壁細(xì)胞？

目前，使用 Culture-Insert插件的傷口**實(shí)驗(yàn)只能用于貼壁細(xì)胞。 然而，單個細(xì)胞的遷移研究可以在 μ-Slide 趨化性中通過將細(xì)胞嵌入到3D基質(zhì)（例如，I 型膠原蛋白凝膠）中進(jìn)行。 

10、是什么使 Culture-Inserts插件在細(xì)胞接種過程中不會泄漏？

Culture-Insert 插件由硅膠材料制成。 上部是粗料，下部是非常柔軟的材料，在按下 Culture-Insert 插件后會固定在表面上。 正確插入時是不會有任何泄漏的。 

11、該如何存儲 Culture-Inserts插件？

請?jiān)谑覝叵聝Υ?Culture-Inserts。 打開過的產(chǎn)品應(yīng)儲存在無菌容器中。 

12、有時很難在 Culture-Insert 插件中看到細(xì)胞層的匯合。 您有什么建議？

當(dāng)使用相差顯微鏡和小孔時，例如 Culture-Insert 插件或 96 孔板，空氣-水界面之間的彎月面會導(dǎo)致表面強(qiáng)烈彎曲。 這會破壞除孔中心以外的任何地方的相位對比效應(yīng)。

一種解決方案是用細(xì)胞培養(yǎng)基完全均勻地填充 Culture-Insert 的兩個孔。 通過這樣做，您可以在孔上方的介質(zhì)和空氣之間創(chuàng)建一個平面。 請記住，這可能會導(dǎo)致兩孔之間的交叉污染。

13、有時，細(xì)胞傾向于聚集在 ibidi Culture-Insert插件的邊緣。 怎樣才能避免這種情況？

當(dāng)細(xì)胞在 Culture-Insert插件中生長到非常高的密度時，會觀察到了這種情況。 為了減少細(xì)胞團(tuán)塊，您應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)開始時使用較低的細(xì)胞密度。 然而，有時細(xì)胞會粘在與細(xì)胞相容的硅膠上。 在這種情況下，我們建議較少孵育時間和/或細(xì)胞數(shù)量。 

14、Culture-Insert 如何在不造成細(xì)胞損傷的情況下模擬生理傷口？

使用體外實(shí)驗(yàn)時，很難以可重復(fù)的方式模擬生理傷口。 當(dāng)然，來自死細(xì)胞的碎片可能在與傷口**相關(guān)的遷移中發(fā)揮作用。 使用 Culture-Insert插件的 ibidi 傷口**實(shí)驗(yàn)提供了可重復(fù)的、無損傷的細(xì)胞貼片。

在體內(nèi)，各種其他參數(shù)對傷口**的影響更大，例如不同細(xì)胞類型的相互作用。 使用 Culture-Insert插件的體外 ibidi 傷口**實(shí)驗(yàn)將遷移速度與所有這些其他影響分開，提供了一個客觀且可重復(fù)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境。

15、用Culture-Insert插件產(chǎn)生間隙時細(xì)胞是否會受損？

Culture-Insert 插件將細(xì)胞彼此分離，而不會產(chǎn)生傳統(tǒng)意義上的傷口（例如，在劃痕實(shí)驗(yàn)期間）。 目的是在不產(chǎn)生大量受傷細(xì)胞的情況下產(chǎn)生間隙，然后研究間隙閉合。該技術(shù)使用戶能夠?qū)⒓?xì)胞的遷移行為與細(xì)胞損傷區(qū)分開來。 

16、 Culture-Inserts 插件能否用于蛋白質(zhì)涂層表面？ 拔出 Culture-Insert 插件會干擾涂層嗎？

一般來說，只要涂層干燥，Culture-Insert 產(chǎn)檢可以放置在涂層表面上。 請注意，插件不會黏附在潮濕的表面上。

但是，我們強(qiáng)烈建議您提前測試插件移除是否會破壞遷移間隙中的涂層。 您可以使用針對涂層蛋白的熒光標(biāo)記抗體來分析這一點(diǎn)。 如果遷移間隙區(qū)域的涂層發(fā)出的熒光信號與開放孔中的一樣均勻和強(qiáng)烈，那么您可以假設(shè)在移除插件后涂層是保持完好的。 經(jīng)過幾次成功的測試后進(jìn)行實(shí)際實(shí)驗(yàn)通常是**的。