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應(yīng)用領(lǐng)域:
●三維細(xì)胞聚集體(例如球體和類器官)的培養(yǎng)和高分辨率顯微鏡
●與ibidi Pump System或任何其他帶Luer連接器的泵設(shè)備一起使用
●在長期培養(yǎng)過程中灌注球體以提供新鮮的培養(yǎng)基,并獲得球體的生長動(dòng)力學(xué)
●直接在孔中產(chǎn)生球體
●球體研究以用于下游處理(例如,熒光,組織學(xué)和生化測(cè)定)
●細(xì)胞單層(貼壁細(xì)胞),懸浮細(xì)胞或共培養(yǎng)的灌注
●具有上下游代謝功能的單片器官設(shè)置
●活細(xì)胞成像和3D細(xì)胞聚集的顯微鏡檢查
●活細(xì)胞和固定細(xì)胞以及細(xì)胞聚集的**熒光染色和高分辨率熒光顯微鏡
技術(shù)特征:
●優(yōu)化的球體/類器官培養(yǎng)和顯微鏡成像孔設(shè)計(jì)
●一張載玻片*多可分析21個(gè)樣品
●灌注可用于3D細(xì)胞聚集體培養(yǎng)過程中的*佳營養(yǎng)供應(yīng)
●開放式孔格式可輕松進(jìn)行樣品制備-用蓋玻片輕松封閉孔以適用于流體培養(yǎng)
●通道創(chuàng)建孔的簡單流體連接
●魯爾接頭使泵連接變得容易(例如,與ibidi泵系統(tǒng)連接)
●提供三種表面:
●生物惰性的表面完全鈍化,無細(xì)胞粘附
●無涂層,可*大程度地減少細(xì)胞粘附和懸浮細(xì)胞
●ibiTreat(經(jīng)組織培養(yǎng)處理)可實(shí)現(xiàn)*佳細(xì)胞粘附
●可以通過ibidi Polymer Coverslip底部使用高分辨率熒光顯微鏡觀察樣品
●與染色和固色液兼容
●與DIC蓋一起使用時(shí)兼容微分干涉對(duì)比(DIC)顯微鏡
●由完全生物相容的材料制成
μ-Slide球體灌注培養(yǎng)原理:
μ-Slide球體灌注是用于培養(yǎng)自由漂浮的3D聚集體的專用流動(dòng)室。它由3 x 7平底孔組成,這些孔通過上方的通道連接。每個(gè)孔形成自己的壁,在此培養(yǎng)標(biāo)本。
通過通道進(jìn)行灌注時(shí),新鮮培養(yǎng)基會(huì)持續(xù)擴(kuò)散到樣本中。這樣可確保在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中獲得*佳的營養(yǎng)和氧氣擴(kuò)散,而樣品不會(huì)受到明顯的剪切力。
該設(shè)置可確保實(shí)現(xiàn)*大的生存能力,但對(duì)球體,類器官或組織的剪切應(yīng)力*小。
此處顯示的是μ-Slide橢球體灌注的單孔中的計(jì)算流體動(dòng)力學(xué)(CFD)模擬。 針對(duì)底部壁fluid中的標(biāo)本優(yōu)化了每個(gè)孔的流體特性。請(qǐng)注意,剪切力在上部孔區(qū)占主導(dǎo)地位,而生態(tài)位受到保護(hù)。
μ-Slide球體灌注載玻片是一個(gè)薄的ibidi聚合物蓋玻片底部,該底蓋具有*高的光學(xué)質(zhì)量(與玻璃相比),非常適合高分辨率顯微鏡檢查。與油浸顯微鏡和熒光成像的兼容,使μ-Slide球體灌注成為理想的球體成像室。
實(shí)驗(yàn)工作流程
μ-Slide球體灌注是一項(xiàng)技術(shù),可為球體,類器官或組織創(chuàng)造理想的條件。它還允許它們同時(shí)培養(yǎng)和成像。
優(yōu)點(diǎn):
●*佳營養(yǎng)和氣體擴(kuò)散
●減少細(xì)胞凋亡和壞死
●增大球體尺寸和壽命
●長期培養(yǎng)具有出色的生存力和增殖能力
●成熟度提高
播種預(yù)成型的球體
通過簡單的工作流程,可以使用移液器輕松地將現(xiàn)有3D細(xì)胞聚集體放入孔中。關(guān)閉孔后,用培養(yǎng)基填充通道,并使用ibidi Pump System或任何其他細(xì)胞培養(yǎng)泵開始灌注??梢允褂盟谐S貌襟E和方法(例如,懸滴,液體覆蓋,ULA平板或生物反應(yīng)器)生成球體。μ-Slide球體灌注本身不需要任何嵌入的基底,支架或支撐結(jié)構(gòu)。
孔內(nèi)球體的形成
或者,可以在帶有Bioinert表面的μ-Slide球狀體灌注孔內(nèi)直接生成球狀體。這種自組織過程是一種簡單且省時(shí)的方法,可在每個(gè)單孔中生成均質(zhì)的球體。
三維細(xì)胞聚集體可以很容易地回收用于下游應(yīng)用,例如組織學(xué),蛋白質(zhì)譜分析和進(jìn)一步培養(yǎng)。
μ-Slide球體灌注的應(yīng)用
μ-Slide球體灌注是一種易于使用的微流生物反應(yīng)器,適用于多細(xì)胞3D聚集體的多種應(yīng)用??蛇x擇地,單個(gè)細(xì)胞在附著到孔底時(shí)可用作懸浮培養(yǎng)物或用作細(xì)胞單層。此外,可以將多種細(xì)胞類型組合在一個(gè)孔中,以創(chuàng)建長期的共培養(yǎng)系統(tǒng)。μ-Slide球體灌注的GM性技術(shù)提供了一種高效且可重現(xiàn)的方法,可以同時(shí)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行生長和成像。
應(yīng)用實(shí)例
灌注培養(yǎng)時(shí)高度改善的球狀體生長速率
L929成纖維細(xì)胞在μ-Slide球狀體灌注中顯示出球狀體,Bioinert,第1至14天,接種濃度為5 x 10 5單細(xì)胞/ ml。左:無灌注,**天換培養(yǎng)基。右:使用ibidi泵系統(tǒng)灌注,0.75毫升/分鐘。相差顯微鏡,10倍物鏡,孔直徑800 μm。
貼壁細(xì)胞熒光成像
接種后2小時(shí)固定在μ-Slide球形灌注液ibiTreat中的L929成纖維細(xì)胞的熒光成像。綠色:F-肌動(dòng)蛋白(phalloidin);藍(lán)色:核(DAPI)。寬視野熒光顯微鏡,10倍物鏡。
基本參數(shù):
通道數(shù) |
3 |
孔數(shù) |
3 x 7 |
孔直徑(底部) |
0.8 mm |
每孔體積 |
3.5 μl |
孔高(底部niche) |
0.4 mm |
每孔生長面積 |
0.5 mm2 |
孔高(總) |
1.3 mm |
孔包被面積(總) |
9.7 mm2 |
每個(gè)注液孔體積 |
60 μl |
通道總?cè)莘e |
45μl |
通道寬度 |
1.0 mm |
通道深度 |
0.2 mm |
底部 |
ibidi標(biāo)準(zhǔn)底 |
頂部 |
ibidi標(biāo)準(zhǔn)底 |
外部尺寸(寬x長) |
25.5 x 75.5 mm |
接頭 |
標(biāo)準(zhǔn)魯爾接頭(母) |